Il laboratorio si trova nella Torre E sud al piano 0, costituito da 3 stanze studio (E7, E10, E12) e 2 stanze tecniche (E9, E11) della Facoltà di Medicina e Chirurgia dell’Università degli Studi di Roma Tor Vergata.
Il Laboratorio di Immunopatologia Sinaptica è un laboratorio di ricerca preclinica il cui obiettivo è studiare i meccanismi molecolari e cellulari alla base dell’interazione tra neuroni e sistema immunitario nella patologia della Sclerosi Multipla (SM) e in altri modelli di neuroinfiammazione.
Le attività di ricerca del laboratorio sono focalizzate sulla comprensione dei processi di disfunzione sinaptica (“sinaptopatia”) indotta dall’infiammazione, con particolare attenzione al ruolo delle cellule immunitarie periferiche, della microglia e dei mediatori infiammatori nel modulare la trasmissione sinaptica e la plasticità neuronale.
Attraverso l’utilizzo di modelli sperimentali di neuroinfiammazione e approcci integrati di neurofisiologia, immunologia e biologia cellulare, il laboratorio analizza i meccanismi attraverso cui l’infiammazione altera i circuiti neuronali e contribuisce alla neurodegenerazione, nonché il modo in cui interventi farmacologici e non farmacologici (come l’esercizio fisico) possano modulare questo crosstalk, con l’obiettivo di identificare nuovi target molecolari per strategie terapeutiche neuroprotettive.
Principali modelli sperimentali:
Encefalomielite Autoimmune Sperimentale (EAE): modello murino di sclerosi multipla (SM) mediante immunizzazione con somministrazione sottocutanea della glicoproteina oligodendrocitaria della mielina (MOG35−55) in topi C57BL/6.
Modello Cuprizone: modello murino per studiare la demielinizzazione e rimielinizzazione tramite trattamento con un chelante del rame (cuprizone) per indurre demielinizzazione tossica nel sistema nervoso centrale.
Modelli chimerici ex vivo di SM/EAE
- Modelli Eterologo uomo-topo: linfociti T e B isolati dal sangue di pazienti con SM oppure liquido cerebrospinale derivato da pazienti con SM (secondo pratica clinica), incubati su fettine di cervello di topo sano, per studiarela la sinaptopatia tramite registrazioni elettrofisiologiche.
- Sistemi topo-topo: linfociti T e B isolati da milza, linfonodi o tessuto cerebrale di animali EAE incubati su fettine di cervello di topo sano, perstudiarela la sinaptopatia tramite registrazioni elettrofisiologiche.
Trattamenti in vivo (farmacologici e non-farmacologici):
- Impianti di minipompe osmotiche (Alzet) a lento rilascio (fino a quattro settimane) oppure di cannule per iniezioni acute intracerebrali di citochine, specifici agonisti/antagonisti recettoriali, farmaci.
- Procedure chirurgiche di vagotomia, sia splenica che cervicale.
- Gavage, iniezioni intraperitoneali, somministrazioni intravenose
Principali tecniche e metodiche di laboratorio
Elettrofisiologia. Registrazioni elettrofisiologiche tramite tecniche di patch-clamp e field potential su slice cerebrali (striato, ippocampo e cervelletto).
Test comportamentali ed esercizio fisico:
- Open Field Test (OFT)
- Elevated Plus Maze (EPM)
- Light-Dark Test (LDT)
- Marble Burying Test
- TailSuspension Test (TST)
- ForcedSwim Test (FST)
- Nest Building Test
- Rotarod Performance Test
- Grip Strength Test
- Esercizio volontario tramite running wheel
Tecniche di biologia molecolare e cellulare per l’analisi dei pathway infiammatori e sinaptici:
- Western blot
- Immunofluorescenza e imaging confocale su tessuto cerebrale o cellule in vitro
- Analisi dell’espressione genica e microRNA mediante real-time PCR
- Dissociazione di tessuti periferici o cerebrali e isolamento immunomagnetico di cellule immunitarie
- Colture cellulari microgliali e astrogliali
Attrezzature presenti:
- Cappa a flusso laminare per manipolazione colture cellulari (EuroClone/Safemate EZ 1.2)
- Frigoriferi per reagenti di laboratorio:
- 1 congelatore −80 °C
- 4 congelatori −20 °C
- frigoriferi +4 °C
- Autoclave (Newmed/LABO1)
- 3 set-up per registrazioni elettrofisiologiche completamente equipaggiati
- Sistema per perfusione transcardiaca di animali da laboratorio
- Centrifuga refrigerata (Eppendorf 5910R)
- Microcentrifuga (Hettich MIKRO120)
- 1 epMotion® 5073l, MultiCon PC (alloggiamento completo, software epBlue, tastiera, mouse, sistema per rifiuti solidi e liquidi)
- 2 bilance di precisione
- Microtomo (Leica SM2010R)
- Vibratomo (Leica VT1200S)
- 2 Puller orizzontali per micropipette (Sutter Instrument)